A simple method was set up to isolate, partially purify and characterize angiotensin-converting enzyme from rabbit lungs. Angiotensin-converting enzyme was purified by a three-step method: Ammonium sulphate precipitation (30-70%), gel filtration chromatography (Sephadex G-75) and ion exchange chromatography (CM-sephadex). The enzyme activity was assayed by monitoring the rate of production of hippuric acid from the hydrolysis of Hippuryl-L-Histidine-L-Leucine by angiotensin-converting enzyme. From the results, the enzyme was purified 6.25-fold with a yield of 21% on CM-Sephadex column. The angiotensin converting enzyme from rabbit lung had a broad optimum pH range (8.0-8.3) and optimum temperature of 37°C. Initial velocity studies for the determination of kinetic constants with Hippuryl-L-Histidine-L-Leucine as substrate revealed a KM and VMAX of 1.8 and 0.4 μmol min-1, respectively. The enzyme activity was not affected by Mg2+, Ca2+, Na+ and K+, while EDTA strongly inhibited it. In conclusion, this study has shown that though angiotensin-converting enzyme can be partially-purified from rabbit lungs via. a three-step purification protocol, the purification steps and assay conditions needs to be modified to obtain a higher yield and specific activity

چکیده

یک روش ساده برای ایزوله کردن، خالص سازی جزئی و تعیین مشخصات آنزیم مبدل آنژیوتانسین از ریه های خرگوش به کار برده شد. آنزیم مبدل آنژیوتانسین بوسیله یک روش سه مرحله ای شامل رسوب دهی با سولفات آمونیوم (%70-30)، کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون (سفادکس G-75) و کروماتوگرافی تعویض یونی (CM-sephadex) خالص سازی گشت. با ردیابی میزان تولید اسید هایپوریک از Hippuryl-L-Histidine-L-Leucine بوسیله آنزیم مبدل آنزیوتانسین، فعالیت آنزیمی سنجیده شد. براساس نتایج حاصل، آنزیم 6.25 برابر با بازدهی 21% بر روی ستون CM-Sephadex خالص سازی گردید. آنزیم مبدل آنزیوتانسین دارای رنج pH اپتیمم گسترده ای از 8 تا 8.3 و دمای اپتیمم 37 درجه بود. مطالعات سرعت اولیه با استفاده از سوبسترای Hippuryl-L-Histidine-L-Leucine برای تعیین ثابت های کینتیک، KM و VMAX به ترتیب برابر با 1.8 و μmol min-1 0.4  را نشان داد. فعالیت آنزیم تحت تاثیر Mg2+، Ca2+، Na+ و K+ قرار نگرفت، در حالیکه EDTA قویا آنرا مهار نمود. این مطالعه نشان داده است که هرچند می توان با استفاده از یک پروتکل سه مرحله ای خالص سازی، آنزیم مبدل آنژیوتانسین را به میزان جزئی از ریه های خرگوش تخلیص نمود، اما برای به دست آوردن محصول بیشتر و فعالیت تخصصی تر باید مراحل خالص سازی و شرایط سنجش را اصلاح کرد.

1-مقدمه

به گفته سازمان بهداشت جهانی، فشار خون بالا را می توان به عنوان یک بیماری مزمن تعریف نمود که بوسیله فشار خون سیستولیک بیشتر یا برابر با mmHg 140 و فشار خون دیاستولیک بیشتر یا برابر با mmHg 90 مشخص می گردد. افراد مبتلا به فشار خون بالا، اغلب برای سالها بدون علامت هستند، ازین رو به این بیماری قاتل خاموش گفته می شود. فشار خون بالا یک عامل خطرساز برای بیماری عروق کرنر قلب، بیماری های قلب عروقی، هیپرتروفی قلب، دیسکسیون آئورت و نارسایی کلیوی محسوب میشود. این بیماری قادر به تسریع روند آتروژنزیز و القای تغییرات مطلوب برای دیسکسیون آئورت و خونریزی عروق مغزی است...